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技術(shù)文章 / article
ATCC細胞系的細胞培養(yǎng)步驟
原載自：m.yxqgjx.cn[技術(shù)資料頻道] 2017-12-21 瀏覽次數(shù)：2716
ATCC細胞系作為正常或腫瘤組織的模式細胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開發(fā)，然而很大一部分的細胞系被錯誤標記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代，由于科學(xué)界無法解決此類問題以致大量因使用錯誤鑒定的細胞系而導(dǎo)致誤導(dǎo)或存在潛在錯誤的學(xué)術(shù)論文發(fā)表。通過近年來的努力而開發(fā)出的STR分型方法已成為對人源細胞進行鑒定的標準方法，STR分型的應(yīng)用成為*細胞錯誤鑒定這一問題的重要一步。
ATCC細胞系的細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備培養(yǎng)基；北美胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．ATCC細胞系的菌種處理：
1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
