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淋巴母細胞株是如何構建成功的？
原載自：m.yxqgjx.cn[行情動態] 2020-05-13 瀏覽次數：1134
細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代數有限，稱為有限細胞株（finitecell strain）；如果可以連續傳代，稱為連續細胞株（continuous cell strain）。對于人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定，并連續傳代的即可稱為連續性株或系。
有關人類淋巴母細胞株的構建：
1.4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640；
2.混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min；
3.1500rpm，15min，吸取白細胞層于另一離心管中；
4.加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次；
5.將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養基中，加入10μl環胞霉素和100μl的EB（EB病毒）液，混勻；
6.水浴搖床，40次/分，37℃，3hr；
7.1500rpm，15min。將細胞接種至1ml培養基中（內含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環胞霉素，輕輕混勻，37℃培養；
8.待5天后觀察細胞轉化和生長情況，決定是否半量換液。一般半量換液l—2次，并維持環胞霉素的濃度；
9.待轉化細胞數量明顯上升，并出現細胞團塊后，可轉入25ml細胞培養瓶中，加1—2ml培養基，37℃培養10—15天，一般每隔3—4天觀察一次，決定是否換液、傳代；
10.細胞生長達一定數量后凍存，凍存前應進行核型分析和存檔。
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